细胞培养的过程控制有点像走钢丝，要在最短的时间内，通过细胞培养的方法获取更高的产量，则必须谨慎且连续地控制工艺过程中的参数；若过程管理出现失误，将导致生产效率下降、运行时间延长；更糟糕的，可能会导致整个批次的细胞培养失败。

　　你在细胞培养的过程中，会遇到哪些问题

　　1、首先讲一下细胞生长缓慢的原因：

　　a)更换了血清或者培养基，细胞需要一段时间适应一下；

　　b)由于细胞的特殊种类，培养基中缺少某些生长因子；

　　c)培养基中有少量真菌或者细菌污染；

　　d)传代的时候细胞密度过低；

　　e)细胞状态老化；

　　2、解决上述问题的方法：

　　a)如果实验室没有某种细胞最适宜的培养基，可以先用原培养条件冻存一些，然后逐渐增加新的培养基比例，25%、50%、75%到100%，传代3-5次后，让细胞慢慢适应。

　　b)判断是不是培养基发生污染，可以先不加抗生素，观察细胞状态。

　　c)增加细胞的接种密度。

　　d)发现细胞老化的时候，及时更换新的细胞。

　　e)如果怀疑是支原体污染，一定要隔离疑似污染的培养皿，及时清洁消毒孵箱。

　　3、造成细胞死亡的原因：

　　a)细胞消化过度；

　　b)没有及时换液，营养成分消耗殆尽；

　　c)如果前一天细胞的状态很好，换液之后就全死了，应该考虑是否是培养基或者血清的问题。

　　4、如何判定细胞是否发生支原体污染：可以选用直接培养法、荧光染色或PCR方法检测，比较常用的是PCR。当细胞发生支原体污染时，原则上是能够去除支原体的，但是整个过程耗时耗力，还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下，建议发现污染时立刻弃掉，重新培养。

　　5、如果孵箱中只是某种细胞持续性大量死亡，而其他细胞状态都没问题的话，基本上可以确定就是孵箱存在特异性感染这类细胞的真菌或细菌。

　　6、其他注意事项：每个星期都要更换孵箱底盘中的水(紫外照射后超纯水)；每两周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新洁尔灭擦拭一遍(都用超纯水配制)；可以在孵箱底部放一个烧杯，里面放入饱和硫酸铜，可以抑制霉菌生长。不过也有人说硫酸铜会改变孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情况很严重，建议不要使用。